Uso de una conantokina y anticuerpos policlonales para identificar la subunidad NR2B del receptor n-metil-d-aspartato

Uso de una conantokina y anticuerpos policlonales para identificar la subunidad NR2B del receptor n-metil-d-aspartato

Publicado 2010-09-01

Abrir | Descargar
PDF FLIP
Cómo citar
Reyes, E., Reyes, E., & Lareo, L. (2010). Uso de una conantokina y anticuerpos policlonales para identificar la subunidad NR2B del receptor n-metil-d-aspartato. Revista MVZ Córdoba, 15(3). https://doi.org/10.21897/rmvz.301
doi

https://doi.org/10.21897/rmvz.301
Dimensions
PlumX
Edwin Reyes
Edgar Reyes
Leonardo Lareo
Mostrar biografía de los autores

Edwin Reyes

Universidad Nacional de Colombia. Departamento de Química. Grupo de Investigación en Proteínas (GRIP

Edgar Reyes

Universidad Nacional de Colombia. Departamento de Química. Grupo de Investigación en Proteínas (GRIP

Leonardo Lareo

Pontificia Universidad Javeriana, Departamento de Nutrición y Bioquímica, Bogotá, D.C.
Objetivo. Proponer una metodología de identificación de la subunidad NR2B, mediante el uso de conantokina G, así como una adecuada extracción de la subunidad NR2B. Materiales y métodos. Se ensayaron dos metodologías para la extracción de la subunidad NR2B de cerebro de rata adulta, la primera buscó la extracción de la subunidad a partir de la membrana mediante la utilización del detergente deoxicolato de sodio y la segunda, garantizó primero la solubilización y eliminación de proteínas citoplasmáticas para luego realizar la extracción de la subunidad mediante el uso del mismo detergente, a partir del pellet generado en la centrifugación del extracto obtenido. Adicionalmente se biotiniló la conantokina G para evaluar su eficiencia en la identificación de la subunidad y comparar los resultados con los obtenidos por metodologías tradicionales como DOT-BLOT, WESTERN-BLOT, ELISA e Inmunohistoquímica. Resultados. La segunda metodología mostró mayor extracción de NR2B por lo que se seleccionó para la realización de los extractos posteriores. Los ensayos de identificación con la conantokina biotinilada evidenciaron interferencia en el reconocimiento, haciéndose necesaria la identificación de la presencia de la subunidad NR2B mediante el uso de anticuerpos policlonales en los ensayos mencionados. Conclusiones. Se propone que hay un impedimento de tipo estérico en el marcaje de la conantokina con la biotina lo que no favorece la interacción de este péptido con la subunidad.

Visitas del artículo 833 | Visitas PDF

Descargas

Los datos de descarga todavía no están disponibles.
  1. Furukawa H, Singh SK, Mancusso R, Gouaux E. Subunit arragement and function in NMDA receptors. Nature 2005; 438: 185-192. http://dx.doi.org/10.1038/nature04089
  3. Loftis J, Janowsky A. The N Metyl D Aspartate Receptor Subunit NR2B: Localization, Funcional Properties, Regulation, and Clinical Implications. Pharmacol Ther 2003; 97: 55-85.
  4. http://dx.doi.org/10.1016/S0163-7258(02)00302-9
  6. Ali DW, Alter MW. NMDA receptor regulation by Src kinase signaling in excitatory synaptic transamission and plasticity. Curr Opin Neurobiol 2001; 11: 336-342. http://dx.doi.org/10.1016/S0959-4388(00)00216-6
  8. Clarke RJ, Johnson JW. Voltaje-dependent gating of NR1/2B NMDA receptors. J Physiol 2008; 586: 5727-5741. http://dx.doi.org/10.1113/jphysiol.2008.160622
  10. Ishii T, Moriyoshi K. Molecular characterization of the family of the N-Methyl-D- Asparatate receptor subunits. J Biol Chem 1993; 268: 2836-2843.
  12. Matsuda K, Fletcher M, Kamiya Y, Yusaki M. Specific assembly with the NMDA receptor 3B subunit controls surface expression and calcium permeability of NMDA receptors. J Neurosci 2003; 23:10064-10073.
  14. Eriksson M, Nilsson A, Froeich-fabre S, Akesson E, Dunker J, Seiger A, et al. Cloning and expression of the human N-methyl-D-Aspartate receptor subunit NR3A. J Neurosci 2002; 321:177-181. http://dx.doi.org/10.1016/s0304-3940(01)02524-1
  16. Nishi M, Hinds H, LU HP, Kawata M, Hayashi Y. Motor neuron-specificexpression of NR3B, a novel NMDA-type glutamate receptor subunit that works in a dominant-negative manner. J Neurosci 2001; 21:RC185.
  18. Donevan SD, McCabe RT. Conantokin G Is an NR2B-Selective Competitive Antagonist of N-Methyl-d-aspartate Receptors. Mol Pharmacol 2000; 58:614-623.
  20. Kew JN, Kemp JA. Ionotropic and metabotropic glutamate receptor structure and pharmacology. Psychopharmacology (Berl) 2005; 179:4-29. http://dx.doi.org/10.1007/s00213-005-2200-z
  22. Wenthold RJ, Prybylowski K, Standley S, Sans N, Petralia RS. Trafficking of NMDA receptors. Annu Rev Pharmacol Toxicol 2003; 43:335-58. http://dx.doi.org/10.1146/annurev.pharmtox.43.100901.135803
  24. Khann A, Stanley M, Bozzetti L, Chin C, Stivers C, Curras-collazo MC. N-Methyl-D-Aspartate receptor subunit NR2B is widely expressed throughout the rat diencephalon: an inmunohistochemical study. J Comp Neurol 2000; 428:428-449. http://dx.doi.org/10.1002/1096-9861(20001218)428:3<428::AID-CNE4>3.0.CO;2-B http://dx.doi.org/10.1002/1096-9861(20001218)428:3<428::AID-CNE4>3.3.CO;2-2
  26. Tamas Blandl, Jaroslav Zajicek, Mary Prorok, Castellino J. Sequence Requirements for the N-Methyl-D-aspartate Receptor Antagonist Activity of Conantokin-RJ. Biol Chem 2001; 276:7391-7396. http://dx.doi.org/10.1074/jbc.M006648200
  28. Williams AJ, Dave JR, Phillips JB, Lin Y, McCabe RT, Tortella FC. Neuroprotective efficacy and therapeutic window of the high-affinity N - methyl - D - Aspartate antagonist Conantokin-G: In vitro (primary cerebellar neurons) and In vivo (Rat model of transient focal brain ischemia) studies. J Pharmacol Exp Ther 2000; 294(1):378-386.
  30. Adams AC, Layer RT, McCabe RT, Keefe KA. Effects of conantokins on L -3, 4-dihydroxyphenylalanine - induced behavior and immediately early gene expression. Eur J Pharmacol 2000; 404(3):303-313. http://dx.doi.org/10.1016/S0014-2999(00)00640-3
  32. Mortari MR, Siqueira AO, Brandao L, Ferreira dos Santos W. Neurotoxins from invertebrades: From basic research to therapeutic application. Pharmacol Ther 2007; 114(2):171-183. http://dx.doi.org/10.1016/j.pharmthera.2007.01.009
  34. Reyes E, Lareo L, Chow DC, Pérez G. Immunolocalization and Biochemical Characterization of N-methyl-D-aspartate Receptor Subunit NR1 from Rat Brain. Protein J 2006; 25(2):95-108. http://dx.doi.org/10.1007/s10930-006-0001-9
  36. Méndez G, Reyes EA, Poutou R, Quevedo B, Lareo Leornardo. Purificación de IgY contra la subunidad NR3 del receptor NMDA de cerebro de rata. Rev MVZ Córdoba 2008; 13(1):1146-1156.
  38. Smith P, Rohn R, Hermanson G, Mallia A, Gartner F, Provenzano M. Measurement of protein using Bicinchoninic Acid. Anal Biochem 1985; 150:76-85. http://dx.doi.org/10.1016/0003-2697(85)90442-7
  40. Marsden KC, Beattie J, Friedenthal J, Carroll RC. NMDA Receptor Activation Potentiates Inhibitory Transmission through GABA Receptor-Associated Protein-Dependent Exocytosis of GABAA Receptors. J Neurosci 2007; 27(52):14326-14337. http://dx.doi.org/10.1523/JNEUROSCI.4433-07.2007
  42. Woof J, Burton D. Human antibody - Fc receptor interactions iluminated by cristal structures. Nat Rev Inmunol 2004; 4:1-11.
  44. Paoletti P, Neyton J. NMDA receptor subunits: function and pharmacology. Curr Opin Pharmacol 2007; 7(1):39-47. http://dx.doi.org/10.1016/j.coph.2006.08.011

Información

SCImago Journal & Country Rank

0.6
2020CiteScore
 
 
28th percentile
Powered by  Scopus
Redib Widget
Tutoriales

Autores:

¿Cómo enviar un artículo?

Par evaluador:

¿Cómo evaluar un artículo?

Palabras clave

Código QR

Número actual

Perfil de Google Scholar

Más leídos en los últimos 30 días

Sistema OJS 3.4.0.3 - Metabiblioteca |