Determinación y cuantificación de bacterias acidolácticas por PCR en tiempo real

Determinación y cuantificación de bacterias acidolácticas por PCR en tiempo real

Published 2010-01-01

Open | Download
PDF (Spanish) FLIP
How to Cite
Phandanouvong, V., Betancourt, L., & Rodriguez, F. (2010). Determinación y cuantificación de bacterias acidolácticas por PCR en tiempo real. Journal MVZ Cordoba, 15(1). https://doi.org/10.21897/rmvz.327
doi

https://doi.org/10.21897/rmvz.327
Dimensions
PlumX
Vienvilay Phandanouvong
Liliana Betancourt
Fernando Rodriguez
Show authors biography
Objetivo. Establecer un ensayo de PCR-TR para determinar el tamaño poblacional y la composición de bacterias totales y de ácido lácticas, en particular las pertenecientes a los géneros Lactobacillus y Bifidobacterium. Materiales y métodos. La especificidad de los iniciadores fue verificada utilizando la técnica de PCR convencional. Diluciones de 101 a 10- 4 ng/µl de ADN fueron preparadas a partir de cada cultivo microbiano y utilizadas en las curvas de calibración. La temperatura de disociación y la eficiencia de cada reacción de PCR-TR se determinaron con el software del iQCycler (Bio Rad®), versión 3.1. Resultados. Los juegos de iniciadores utilizados resultaron específicos para cada grupo microbiano, sin detectar reacción cruzada. Las eficiencias de las reacciones de la PCR-TR para bacterias totales, acidolácticas, Lactobacillus y Bifidobacterium fueron 104.4%, 98.1%, 113.3% y 103.3%, respectivamente. Conclusiones. Al obtener reacciones específicas y eficiencias cercanas al 100%, es posible cuantificar las poblaciones bacterianas totales, acidolácticas, Lactobacillus y Bifidobacterium con una alta especificidad. Por lo tanto, la técnica de PCRTR puede utilizarse para monitorear cambios poblacionales bacterianos en ambientes como el tracto gastrointestinal de pollos de engorde, donde las bacterias acidolácticas, Lactobacillus y Bifidobacterium son habitantes comunes.

Article visits 1070 | PDF visits

Downloads

Download data is not yet available.
  1. Pfaffl MW. A new mathematical model for relative quantification in real time RT-PCR. Nucleic Acids Res 2001; 29(9): 2003-2007. http://dx.doi.org/10.1093/nar/29.9.e45
  3. Kubista M, Andrade JM, Bengtsson M, Forootan A, Jonak J, Lind K et al. The real-time polymerase chain reaction. Mol Aspects Med 2006; 27:95-125. http://dx.doi.org/10.1016/j.mam.2005.12.007
  5. Larionov A, Krause A, Miller W. A standard curve based method for relative real time PCR data processing. BMC Bioinformatics 2005; 6:62-78. http://dx.doi.org/10.1186/1471-2105-6-62
  7. Viljoen GJ, Nel LH, Crowther JR. Molecular diagnostic PCR handbook. Dordrecht, Holanda: Editorial Springer; 2005.
  9. Granja CB, Vidal OM, Parra G, Salazar M. Hyperthermia reduces viral load of white spot syndrome virus in Penaeus vannamei. Dis Aquat Org 2006; 68:175-180. http://dx.doi.org/10.3354/dao068175
  11. Bustin SA, Mueller R. Real-time reverse transcription PCR (qRT-PCR) and its potential use in clinical diagnosis. Clin Sci 2005; 109:365-379. http://dx.doi.org/10.1042/CS20050086
  13. Rutledge RG, Côté C. Mathematics of quantitative kinetic PCR and the application of standard curves. Nucleic Acids Res 2003; 31(16):e93-e99.
  15. Mocellin S, Rossi CR, Pilati P., Nitti D, Marincola FM. Quantitative real-time PCR: a powerful ally in cancer research. Trends Mol Med 2003; 9(5):189-195. http://dx.doi.org/10.1016/S1471-4914(03)00047-9
  17. Makkar HPS, McSweeney CS. Methods in gut microbial ecology for rumiants. Dordrecht, Holanda: Editorial Springer; 2005.
  19. Dorak MT. Real-time PCR. New York, EUA: Editorial Taylor & Francis Group; 2006.
  21. Matsuki T, Watanabe K, Fujimoto J, Takada T, Tanaka R. Use of 16S rDNA gene-targeted group-specific primers for real-time PCR analysis of predominant bacteria in human feces. Appl Environm Microbiol 2004; 70(12):7220-7228. http://dx.doi.org/10.1128/AEM.70.12.7220-7228.2004
  23. Wang RF, Cao WW, Cerniglia CE. PCR detection and quantification of predominant anaerobic bacteria in human and animal fecal samples. Appl Environm Microbiol 1996; 62(4):1242-1247.
  25. Haarmann M, Knol J. Quantitative real-time PCR analysis of fecal Lactobacillus species in infants receiving a prebiotic infant formula. Appl Environm Microbiol 2006; 72:2359-2365. http://dx.doi.org/10.1128/AEM.72.4.2359-2365.2006
  27. Bartosch S, Fite A, Macfarlane JT, McMurdo MET. Characterization of bacterial communities in feces from healthy elderly volunteers and hospitalized elderly patients by using real-time PCR and effects of antibiotic treatment on the fecal Microbiota Appl Environm Microbiol 2004; 70(6):3575-3581.
  29. Lan Y, Xun S, Tamminga S, Williams BA, Verstegen MW, Erdit G. Real-Time PCR detection of lactic acid bacteria in cecal contents of Eimeria tenella-infected broilers fed soybean oligosaccharides and soluble soybean polysaccharides. Poult Sci 2004; 83:1696-1702. http://dx.doi.org/10.1093/ps/83.10.1696
  31. Bartosch S, Woodmansey EJ, Paterson JCM, McMurdo MET, Macfarlane GT. Microbiological effects of consuming a symbiotic containing Bifidobacterium bifidum, Bifidobacterium lactis and oligofructose in elderly persons, determined by real-time polymerase chain reaction and counting of viable bacteria. Clin Infect Dis 2005; 40(1):28-37. http://dx.doi.org/10.1086/426027
  33. Thakuria D, Schimdt O, Siurtain MM, Egan D, Doohan FM. Importance of DNA quality in comparative soil microbial community structure analysis. Soil Biol Biochem 2008; 40:1390-1403. http://dx.doi.org/10.1016/j.soilbio.2007.12.027
  35. Tajima K, Aminov RI, Nagamine T, Matsui H, Nakamura M, Benno Y. Diet-dependent shifts in the bacterial population of the rumen revealed with real-time PCR. Appl Environ Microbiol 2001; 67:2766-2774. http://dx.doi.org/10.1128/AEM.67.6.2766-2774.2001

Information

SCImago Journal & Country Rank

0.6
2020CiteScore
 
 
28th percentile
Powered by  Scopus
Redib Widget
Tutorials

Autors:

How send article?

Evaluator pair

How to evaluate an article?

Keywords

QR code

Current Issue

Perfil de Google Scholar

Most read in the last 30 days

Sistema OJS 3.4.0.3 - Metabiblioteca |